以人體胎盤提取液皮內(nèi)反應(yīng)進(jìn)行癌癥普查的研究

中國預(yù)防醫(yī)科院流行病學(xué)徽生物學(xué)研究所 張見麟

中國科學(xué)院武漢病毒研究所 黃文林

湖北省沙市第一人民醫(yī)院 黃鳳翥

　　1962年松原正香發(fā)現(xiàn)人體胎盤與癌組織在生物學(xué)方面有相似之處，他以人體胎盤代替癌組織提取了抗原，對病人進(jìn)行皮試，發(fā)現(xiàn)與尚未轉(zhuǎn)移的早期癌的陽性率可高達(dá)94,5%。因此，日本全國癌癥中心自1972年起已釆用此法進(jìn)行癌癥普查，國內(nèi)一些單位也進(jìn)行了某些報(bào)道，但至今尚未推廣，究其原因，一則病例較少，同時(shí)還存在一些技術(shù)上難以推廣的問題，如其安全性特別是乙肝抗原攜帶問顥，每次制品效價(jià)測定需在健康人身上進(jìn)行，以及保存期等等。我們研究并解決了這些問題，為推廣此法打下了基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)告如下。

　　1、材料與方法

　　1.1人體胎盤提取液的制備：取新鮮健康足月順產(chǎn)第一胎產(chǎn)婦的人體胎盤，毎個胎盤血清事先均以放射免疫方法檢査其是否擁帶乙肝表面抗原，只有HBsAg陰性者才能采用。將胎盤剪去羊腆及血管，切成小塊，邊沖洗邊擠壓，直入3倍量無水乙醇，混勻置40C冰箱過夜。次日用濾紙過濾，濾后沉渣連同濾紙一起置40C冰箱中陰干，剝下稱重，加入0.4%的酚，0.9%NaCl蒸餾水，使成3%(W/V)。溶液冰箱過夜后，以玻璃組織研磨器將將其磨碎混勻，濾器除菡，抽濾后澄清液即為胎人體盤提取液。

　　將上述提取液接種于肉湯培養(yǎng)基及髙層固體穿刺培養(yǎng)10天，無苗生長。并取體重18-20g小白鼠10只，一組不注射對照，另一組注入1:8稀釋的人體胎盤提取液進(jìn)行安全試驗(yàn)。觀察注后30min、24h、48h、72h直到10天，兩組小鼠均無異常反應(yīng)。

　　1.2效價(jià)測定及保存：國內(nèi)外報(bào)吿效價(jià)測定方法均為將提取液稀釋成不同濃度，然后毎個濃度接種7?8個健康人，選擇皮膚反應(yīng)大小正好在18-20mm之間的濃度為合適濃度(該濃度即為效價(jià))。但此法較麻煩，不易推廣，因此我們改用72型分光光度計(jì)，雙縮尿法到水中無血色。稱重后加入倍量50C蒸餾水，在攪拌器(12000r/min)中攪拌1min，共2次，成勻漿，——20C過夜凍結(jié)。次日在40C及室溫中融解，補(bǔ)充50C蒸餾水，使成胎盤重量的3倍，攪拌均勻，矯正PH到6.0，置400C水浴，每小時(shí)順時(shí)鐘方向攪動1次。10h后40C冰箱過夜。取出后以2層紗布過濾，棄去沉渣，用0,1N NaOH將濾液的PH調(diào)整到6.4，冰箱過夜，次日以3000r/min離心7-8min，上清40C保存,沉淀加2倍量蒸餾水，用NaOH調(diào)PH到6.8，同上離心，棄沉渣，上清調(diào)PH到7.2，再置冰箱過夜，同上離心，將上清PH調(diào)到8.5。最后離心所得少最沉淀物與保存于冰箱內(nèi)PH值6.4的上清混合在一起，測量體積，加測定O.D.來代替人休注射測效法，以不同濃度(1:4，1:6，1:8)注入健康人觀察反應(yīng)，并同時(shí)測O.D.540值，發(fā)現(xiàn)1:6時(shí)皮膚反應(yīng)大小正好為18?20mm，O.D.為0.06。

　　本試驗(yàn)采用取液保存方法保存效價(jià)，要達(dá)到0.05O.D.，保存4個月后的原液需1 ：5稀釋，而保存7-12個月后則需1：3稀釋。

　　1.3皮膚試膾方法：在患者前臂正中1/3掌側(cè)面，經(jīng)75%酒精消毐后，用結(jié)核菌索注射器皮內(nèi)注射人體胎盤提取液0.2ml，4h后觀察反應(yīng)并記彔。

　　2結(jié)果

　　2.1反應(yīng)安全牲 3年間共觀察各種病人及健康人455例，1例因事先沒有詳細(xì)詢問皮膚過敏史，在皮內(nèi)注射劑后72h發(fā)生全身過敏，體溫輕度升高，經(jīng)一般脫敏治療后即痊愈。其余454人均無任何反應(yīng)。

　　2.2診斷結(jié)果

　　2.2.1 對照組(非腫瘤病人及健康人)共160人，其中皮膚反應(yīng)最大徑超過25mm以上的有25人，陽性率為15.6%。25人中病人18人，其中7人為慢性淋巴結(jié)炎、淋巴結(jié)核，其他為慢性乳 腺增生、肝膿腫等，最長徑平均大小為28.6mm。

　　2.2.2 觀察I組(未未經(jīng)抗癌治療確診為惡性腫瘤者)共191人，其中包括早期癌癥128例，晚期癌癥63例。早期癌癥4 h皮膚反應(yīng)超過25mm以上者共107例，陽性率達(dá)83.6%。其中早期消化道癌癥陽性率高達(dá)92.8%(52/56)，其次是早期生死泌尿系統(tǒng)癌癥為91.3%(21/23)。晚期癌癥陽性率較低，平均陽性率僅39.7%。早晚期合計(jì) 平均陽性率為69.6%。

　　2.2.3 觀察II組(經(jīng)抗癌治療過的病人)共91例，平均陽性率為49.5%。

　　2.2.4 觀察III組(未經(jīng)治療的良性腫瘤病人)共28例，陽性8人，平均陽性率為30.7%。

　　2.2.5 4組陽性率比較 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)(X2) ，對照組與觀察I組的陽性率有明顯差定 為腸癌。臨床雖懷疑惡性腫瘤， 但皮試陰性，用其他方法最后否定惡性腫瘤典型病例有9例。在湖北省宜昌地區(qū)五峰縣魚關(guān)鄉(xiāng)宮頸癌病人。其中皮試陽性的7人，可疑反應(yīng)1人，陰性1人。而非癌婦女24人 中除3人可疑外，無1例陽性反應(yīng)，符合率較高。

　　確診為癌癥，皮試陽性病 人3例，經(jīng)地賽 米松3mg脫敏，第2次皮試仍保持陽性。而在非癌病人7例皮試陽性者經(jīng)脫敏試驗(yàn)，其中5人轉(zhuǎn)為陰性，2人仍保持陽性，2人中1人為過敏體質(zhì)。通過脫敏試驗(yàn)證明胎盤皮試反應(yīng)是特異的。

　　關(guān)于人體胎盤提取液的保存國內(nèi)尚無報(bào)道。本研究對 40C保存的及稀釋液進(jìn)行了比較，結(jié)果證明稀釋后保存的人體胎盤提取液，經(jīng)4個月后效果明顯下降(1:4)，保存前O.D.為0.07，4個月后下降為0.03，而1:6稀釋液保存前為0.06，4月后下降為0.015。而未經(jīng)稀釋的原液在40C下保存4個月，臨用時(shí)再稀釋，則效價(jià)不明顯下降。更長時(shí)間的保存效果尚待觀察。

　　總之，此法簡單易行，對早期發(fā)現(xiàn)惡性，特別是消化道、生殖道癌癥有較高符合率。我們的研究不僅用比其他報(bào)告者多10倍 人 異(P<0.001);觀察I組與現(xiàn)察II組間陽性率也有明兄差異(P<0.001);對照組與觀察III組比較無明顯差異。

　　3、討論

　　用簡便方法進(jìn)行癌癥普賢査是早期發(fā)現(xiàn)癌癥的重要手段，國內(nèi)雖有少數(shù)單位試驗(yàn)過人體胎盤提取液皮內(nèi)反應(yīng)，但因安全性差、測效價(jià)難、觀察例數(shù)少(幾十例〉等原因未能推廣應(yīng)用。本文共觀察455例，未轉(zhuǎn)移早期癌平均陽性率達(dá)83.6%，特別是早期消化道癌及泌尿生殖系統(tǒng)癌,陽性率分別達(dá)91.3?92.8%。即使晚期癌癥與非腫瘤病人陽性率(15.6%)之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上也有非常顯著差異，臨床懷疑惡性腫瘤，皮試陽性，最后用病理學(xué)等方法確診的典型病例有18例，其中笫16例陳X X臨床疑似腸癌，但X光不支持，然而皮試陽性，最后用乙狀鏡確數(shù)證實(shí)這種方法的可靠性，而且進(jìn)行了改進(jìn)，特別對其安全性，人體胎盤血事先用放免測定乙肝抗原，同時(shí)以測光密度法代替在人體上測定效價(jià)，以及研究了保存時(shí)間及方法，這些均有利于本法進(jìn)一步進(jìn)行中間試驗(yàn)及大面積推廣。

用簡便方法進(jìn)行癌癥普賢査是早期發(fā)現(xiàn)癌癥的重要手段，國內(nèi)雖有少數(shù)單位試驗(yàn)過人體胎盤提取液皮內(nèi)反應(yīng)，但因安全性差、測效價(jià)難、觀察例數(shù)少(幾十例〉等原因未能推廣應(yīng)用。本文共觀察455例，未轉(zhuǎn)移早期癌平均陽性率達(dá)83.6%，特別是早期消化道癌及泌尿生殖系統(tǒng)癌,陽性率分別達(dá)91.3?92.8%。即使晚期癌癥與非腫瘤病人陽性率(15.6%)之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上也有非常顯著差異，臨床懷疑惡性腫瘤，皮試陽性，最后用病理學(xué)等方法確診的典型病例有18例，其中笫16例陳X X臨床疑似腸癌，但X光不支持，然而皮試陽性，最后用乙狀鏡確數(shù)證實(shí)這種方法的可靠性，而且進(jìn)行了改進(jìn)，特別對其安全性，人體胎盤血事先用放免測定乙肝抗原，同時(shí)以測光密度法代替在人體上測定效價(jià)，以及研究了保存時(shí)間及方法，這些均有利于本法進(jìn)一步進(jìn)行中間試驗(yàn)及大面積推廣。